Preguntas Frecuentes: <61> Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano

FAQs for Microbiological Examination of Non-Sterile Products: Microbial Count Tests

1. ¿Puedo usar cepas distintas a las citadas en la USP?

Se deben usar las cepas citadas en el Capítulo General <61> o cepas de otras colecciones de cultivos que sean equivalentes. Por ejemplo, si se indica Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, se debe usar esta cepa o cepas de otras colecciones de cultivos que indiquen equivalencia a ATCC 9027. Otras cepas tales como ATCC 14149 no son apropiadas.

2. ¿Existe un método para verificar que hay 100 UFC en el inóculo?

Se puede establecer una curva de calibración turbidimétrica o usar otro método adecuado para posteriormente poder obtener una estimación de la concentración del inóculo. Esto se puede confirmar más tarde mediante métodos de siembra en placa típicos, tales como los descritos en el Capítulo General USP <51>. Asimismo, se pueden utilizar cepas certificadas listas para usar.

3. ¿Cuándo se supone que debe realizarse el control negativo: al momento de analizar la aptitud del método, cuando se analiza el producto, o en ambos casos?

El control negativo debe incluirse al mismo tiempo que se analiza el producto.

4. ¿Cuál es el propósito del control negativo?

El propósito de este control negativo es demostrar que no hay contaminación durante el análisis del producto. Si se obtiene un resultado positivo con un control negativo, la prueba puede considerarse inválida y debe repetirse.

5. ¿Se tiene que realizar cada vez que se analiza el producto o durante la validación del método, o es posible realizarlo periódicamente?

Los controles negativos deben incluirse cada vez que se analiza el producto.

6. ¿Es necesario analizar la promoción del crecimiento en todas las partidas de medio recibidas o sólo se realiza como validación microbiológica? ¿Se tiene que analizar la promoción del crecimiento de caldo diluido?

La promoción del crecimiento debe analizarse para cada partida nueva de medio. La promoción de crecimiento debe verificarse en medios de agar y caldo nutritivo, pero no en caldo diluido.

7. ¿Se tiene que analizar sistemáticamente en paralelo una partida de medio previa y aprobada para compararla con una nueva partida?

No es necesario analizar una partida previa en paralelo. Se puede realizar la comparación de los datos registrados si se ha descrito claramente el crecimiento.

8. ¿Por qué las pruebas de promoción del crecimiento tienen que realizarse en agar Sabouraud Dextrosa (SDA, por sus siglas en inglés) y en agar Digerido de Caseína y Soja (CSA, por sus siglas en inglés) para C. albicans y A. niger? ¿Es porque las colonias de hongos detectadas en el agar Digerido de Caseína y Soja se cuentan como parte del recuento total de microorganismos aerobios?

Es cuestión de definición. Por definición, el recuento total de microorganismos aerobios incluye levaduras y hongos filamentosos. Por lo tanto, los medios deben ser verificados con estos microorganismos.

9. Dado que las bacterias que crecen en el agar Sabouraud Dextrosa también se cuentan como parte del recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras, ¿por qué no se requiere realizar las pruebas de promoción del crecimiento en el agar Sabouraud Dextrosa con las cepas bacterianas?

El recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras es por definición un recuento de levaduras y hongos filamentosos, por lo que la promoción del crecimiento con bacterias no es esencial. Se puede usar agar Sabouraud Dextrosa con antibióticos como una alternativa cuando se espera que el recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras exceda el criterio de aceptación debido al crecimiento bacteriano.

10. ¿Qué significa el factor de 2? ¿Cómo se calcula dicho factor?

Significa que el resultado puede ser el doble que el del inóculo. Por ejemplo, con un inóculo de 100 UFC, los recuentos aceptables son: 100/2 = 50 UFC a 100 x 2 = 200 UFC. El factor se introduce para tener en cuenta la variabilidad del método.

11. ¿Cuál es el volumen suficiente de la suspensión microbiana de no más de 100 UFC? ¿A qué se refiere 100 UFC?

Los microorganismos se deben agregar al producto diluido o suspendido al terminar la preparación (por lo general, se prepara una dilución de 1 en 10) o después de la neutralización (en la última fracción del líquido de enjuague al usar el método de filtración o simultáneamente con la preparación en la placa de Petri al usar el método de recuento en placa) si es que no hay otro modo de evitar la inhibición del crecimiento debida a la muestra. 100 UFC se refiere al inóculo (p. ej., lo que se encontrará en el filtro o en la placa).