FAQs of Microbiological Examination of Non-Sterile Products: Testing for Specific Microorganisms
Download the documentSe deben usar las cepas citadas en este capítulo, o cepas de otras colecciones de cultivos que sean equivalentes. Por ejemplo, si se indica Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, se debe usar esta cepa o cepas de otras colecciones de cultivos que indiquen equivalencia a ATCC 9027. Otras cepas tales como ATCC 14149 no son apropiadas.
El control negativo debe realizarse al mismo tiempo que se analiza el producto.
El propósito del control negativo es demostrar que no hay contaminación durante el análisis del producto. Si se obtiene un resultado positivo con un control negativo, la prueba puede considerarse inválida y debe repetirse.
Los controles negativos deben incluirse cada vez que se analiza el producto.
La promoción del crecimiento debe verificarse para cada partida nueva de medio.
No es necesario analizar una partida previa en paralelo. Se puede realizar una comparación de los datos registrados si se ha descrito claramente el crecimiento.
Se puede usar el factor de 2, según se describe en USP <61>. El capítulo no provee un requisito estricto deliberadamente, debido a que la prueba es cualitativa, no cuantitativa. Uno mismo puede definir el criterio de comparabilidad. Por ejemplo, el tamaño de la colonia al menor tiempo de incubación prescrito.
Para propiedades de promoción del crecimiento de los medios, se debe incubar durante no más de 18 horas (en las condiciones más exigentes).
Para propiedades inhibitorias de los medios, se debe incubar durante no menos de 24 horas (en las condiciones más exigentes). Para propiedades indicativas de los medios, se puede incubar dentro del intervalo de tiempo especificado (en este caso, de 18 horas a 24 horas).
Esto puede observarse, ya que en caldo Rappaport Vassiliadis para enriquecimiento de Salmonella, se inoculan números bajos de Salmonella spp. (por lo general, el inóculo es de aproximadamente 20 UFC por 10 mL de caldo Rappaport Vassiliadis para enriquecimiento de Salmonella).
Incluso si el caldo de enriquecimiento parece transparente, se debe confirmar la recuperación de Salmonella mediante subcultivo del caldo Rappaport Vassiliadis para enriquecimiento de Salmonella en agar sólido.
Las cepas deben inocularse individualmente según se indica en el método. No se permite inóculo mezclado.
Solo se inocula el microorganismo especificado que se está detectando.
No es necesario usar una cepa inhibitoria para analizar la aptitud del método. Por ejemplo, si se analiza la aptitud del método para E. coli, se debería usar solamente E. coli como microorganismo de prueba para la promoción del crecimiento.
No siempre. Para productos que únicamente se diferencian en la cantidad del ingrediente activo, se puede emplear un enfoque de análisis de extremos.
En ambos casos, los microorganismos deben agregarse al momento de la mezcla con el caldo de incubación previa o con el caldo de resucitación. Si se toma como ejemplo el caso de bacterias gram-negativas tolerantes a la bilis, se refiere a la subsección «Preparación de la Muestra e Incubación Previa». Los microorganismos se agregan al caldo Digerido de Caseína y Soja inmediatamente antes o después de agregar el producto a examinar. Por lo tanto, los microorganismos están presentes durante todo el periodo de resucitación de 2 – 5 horas.
Esto es para simular la situación en la que estuvieran presentes 100 ufc en la muestra a examinar, por lo general 1 g del producto pero 10 g para Salmonella (cf. la sección Salmonella), resp.
Ejemplo: Supóngase que se diluyen 10 g de producto en 100 mL de caldo Digerido de Caseína y Soja. Posteriormente, se agregan menos de 100 ufc a esta suspensión.
Los organismos de prueba deben agregarse al momento de la mezcla con el medio para la incubación previa. Se debe intentar inactivar la actividad antimicrobiana en la mayor medida posible. La adición de microorganismos en un momento posterior de la prueba no es una medida razonable. Si no es posible lograr la inactivación, se puede abandonar la prueba para el producto debido a que se asume que el microorganismo especificado no será capaz de sobrevivir en el producto.
Se debe demostrar el funcionamiento en las condiciones más exigentes. Asimismo, se está trabajando con células sanas y estas deberían proveer la respuesta requerida en el tiempo más corto.
Se observan colonias características en el agar selectivo y no se observan dichas colonias con un producto no inoculado, examinado simultáneamente como un blanco negativo.
Puede hacer referencia a la cláusula citada en la pregunta una vez que se demuestre que se han probado todos los métodos posibles.
No existe una definición estricta de este grupo de microorganismos. Éstos se definen en términos operativos como los microorganismos que muestran crecimiento en el medio Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa en las condiciones establecidas. Incluyen bacterias gram-negativas que crecen en presencia de sales biliares y no fermentan la lactosa, pero son capaces de utilizar la glucosa (p. ej., algunas bacterias gram-negativas tolerantes a la bilis incluyen miembros de la familia Enterobacteriaceae, Pseudomonadales y Aeromonas).
¿Se puede usar un intervalo de temperatura alternativo, p. ej., 35 – 37°C, siempre que se demuestre la recuperación de E. coli durante la calificación?
El propósito de la temperatura elevada, 42 – 44°C es permitir condiciones selectivas para E. coli fecal. La temperatura seleccionada es por lo general un compromiso entre la sensibilidad y la especificidad dado que no todas las cepas de E. coli crecerán, o crecerán y producirán gas, a estas temperaturas de incubación más elevadas.
Un intervalo de temperatura alternativo se apartaría del método USP, aunque siempre se pueden usar métodos alternativos conforme a lo descrito en las Advertencias Generales de la USP y USP<1223>.
Es necesario confirmar que la prueba funciona durante el tiempo mínimo del análisis de rutina. De hecho, cuando una empresa determine durante el análisis de aptitud que el tiempo mínimo de incubación no es suficiente para un producto dado, sino que se requiere un tiempo de incubación más largo, la prolongación sería una variación necesaria de la prueba.
La cantidad preincubada es 1 g, por lo tanto, el resultado de la prueba es «ausencia en 1 g». Para Salmonella, puede observarse que se ha implementado la prueba de «ausencia en 10 g».
Su producto puede estar contaminado, quizás no por las especies descritas en la USP sino por otro microorganismo. Las buenas prácticas de laboratorio sugieren que existe un problema y que debe ser investigado (p. ej., identificar la especie y determinar su procedencia). Es probable que el producto no pueda ser liberado, pero la decisión quedará a criterio del gerente del laboratorio de Control de Calidad.
Para órganos animales en polvo, productos con riesgo de contaminación fecal por clostridios y posible proliferación, materias primas naturales y posible contaminación telúrica. Sin embargo, aún no se ha introducido en ninguna monografía. La prueba se vuelve particularmente relevante cuando se expone una preparación a condiciones anaeróbicas o de bajo contenido de oxígeno.
Los métodos que usan medios alternativos se consideran métodos alternativos, los cuales podrán usarse según se indica en las Advertencias Generales 6.30.
Se puede usar un electrodo robusto. Existen electrodos para medición en muestras semisólidas tales como carne, queso y fruta. Estos electrodos son adecuados para mediciones en agar sólido. El ajuste del pH debe realizarse durante la preparación del medio para asegurar que se cumpla con el criterio de pH en el medio final.
La composición del agar manitol salado ha sido optimizada para recuperar S. aureus e inhibir E. coli (pH, cualidades nutritivas…). Se debe verificar que la temperatura de incubación sea la correcta. Además, puede presentarse un problema de estabilidad del medio y, por ende, se debe verificar que el medio haya sido almacenado en las condiciones adecuadas. Por último, se puede intentar recurrir a diversos proveedores de medios, lo cual puede generar mejores resultados.